本發(fā)明涉及一種大孔徑的多孔質(zhì)粒子以及使用其的高處理速度下的色譜技術(shù)。
背景技術(shù)：
1、在用于生物醫(yī)藥品等的分離、精制的色譜中，由于多孔質(zhì)粒子具有大的表面積，因此作為結(jié)合容量高的材料被利用。近年來(lái)，進(jìn)行了如下努力：通過(guò)將多孔質(zhì)粒子的細(xì)孔設(shè)為連續(xù)孔，粒子內(nèi)部的連通孔的空隙也可作為吸附部位利用(專利文獻(xiàn)1、專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)3)。另外，以往的多孔質(zhì)粒子為了抗體、蛋白質(zhì)、核酸等通常為5nm～10nm范圍的尺寸的生物體分子的分離而進(jìn)行了最優(yōu)化，與此相對(duì)，為了增大病毒等更大的粒子的結(jié)合容量，進(jìn)行了如下努力：通過(guò)增大多孔質(zhì)粒子的細(xì)孔徑而可在細(xì)孔內(nèi)吸附大的粒子(專利文獻(xiàn)4)。
2、近年來(lái)，為了提高生物醫(yī)藥品等的生產(chǎn)性，每單位時(shí)間使目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合的能力受到關(guān)注。所述能力是以每單位體積、每單位時(shí)間結(jié)合的目標(biāo)物質(zhì)量(mg/ml/min)表示，其會(huì)有助于減少用于分離、精制的色譜吸附材料和/或縮短分離、精制所需的時(shí)間。在以往的向多孔質(zhì)粒子的結(jié)合中，目標(biāo)物質(zhì)向粒子的孔內(nèi)的擴(kuò)散成為限速，因此特別是在滯留時(shí)間低于1分鐘的高處理速度下，若為了縮短向填充有粒子的管柱的滯留時(shí)間而提高流速，則目標(biāo)物質(zhì)向粒子的結(jié)合容量顯著降低，因此存在流速的提高不會(huì)有助于提高生產(chǎn)性的問(wèn)題。作為解決此種高處理速度下的結(jié)合容量降低問(wèn)題的方法，已知有使用膜(membrane)或整料(monolith)、纖維來(lái)代替多孔質(zhì)粒子的色譜精制法。在此種材料中，由于液體通過(guò)廣泛打開(kāi)的纖維之間，因此不易達(dá)到擴(kuò)散限速，具有可減小結(jié)合容量的流速依賴性的特征。然而，膜或整料、纖維無(wú)法填充到以往使用的管柱中，存在需要專用的容器的問(wèn)題。另外，若使用膜或整料、纖維，則存在堵塞時(shí)壓力會(huì)急劇上升的問(wèn)題。
3、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
4、專利文獻(xiàn)
5、專利文獻(xiàn)1：國(guó)際公開(kāi)第2016/013568號(hào)
6、專利文獻(xiàn)2：國(guó)際公開(kāi)第2017/026424號(hào)
7、專利文獻(xiàn)3：日本專利特開(kāi)2020-026511號(hào)公報(bào)
8、專利文獻(xiàn)4：日本專利特表2022-515769號(hào)公報(bào)
9、專利文獻(xiàn)5：國(guó)際公開(kāi)第2015/029790號(hào)
10、非專利文獻(xiàn)
11、非專利文獻(xiàn)1：w.m.迪恩、f.g.史密斯iii(w.m.deen,f.g.smith?iii)、《膜科學(xué)雜志(j.membr.sci.)》1982,12,217-237
12、非專利文獻(xiàn)2：p德菲利普斯、a?m倫霍夫(p?dephillips,a?m?lenhoff)、《色譜雜志a.(j?chromatogr?a.)》2000,883,39-54
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、發(fā)明所要解決的問(wèn)題
2、如上所述，為了提高生物醫(yī)藥品等的分離、精制效率，可在提高每單位體積、每單位時(shí)間結(jié)合的目標(biāo)物質(zhì)量(生產(chǎn)性)的同時(shí)，有效利用作為以往的設(shè)備的填充管柱，要求堵塞風(fēng)險(xiǎn)小的精制法。
3、因此，本發(fā)明的課題在于提供一種用以使用將填充劑填充到管柱中的以往的裝置來(lái)進(jìn)行高處理速度下的生物醫(yī)藥品等的精制的技術(shù)。
4、解決問(wèn)題的技術(shù)手段
5、本發(fā)明人等人為了解決所述課題而進(jìn)行了努力研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)具有三維網(wǎng)狀的骨架及包含其空隙的特定的連通孔結(jié)構(gòu)且具有較大的連通孔的多孔質(zhì)粒子，且發(fā)現(xiàn)通過(guò)將所述多孔質(zhì)粒子作為色譜載體使用，即使在高流速條件下也可維持高吸附量，從而完成了本發(fā)明。
6、即，本發(fā)明如以下所述。
7、[1]一種多孔質(zhì)粒子，其特征在于，
8、其為大致球狀，具有三維網(wǎng)狀的骨架及包含其空隙的連通孔結(jié)構(gòu)，且所述連通孔從粒子表面貫通到內(nèi)部，
9、在將所述多孔質(zhì)粒子填充到內(nèi)徑0.78cm、長(zhǎng)度30cm的管柱中，將純水作為流動(dòng)相，以25℃的管柱溫度及0.4ml/分鐘的流量通入包含5mg/ml的粒徑100nm的二氧化硅微粒子的漿料時(shí)，所述二氧化硅微粒子的保持時(shí)間為15.0分鐘以上。
10、[2]根據(jù)[1]所述的多孔質(zhì)粒子，其特征在于，細(xì)孔徑為650nm以上。
11、[3]一種多孔質(zhì)粒子，由配體修飾，所述多孔質(zhì)粒子的特征在于，
12、其為大致球狀，具有三維網(wǎng)狀的骨架及包含其空隙的連通孔結(jié)構(gòu)，且所述連通孔從粒子表面貫通到內(nèi)部，
13、細(xì)孔徑為400nm以上。
14、[4]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，主要成分為乙酸纖維素或纖維素。
15、[5]根據(jù)[1]至[4]中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，中值粒徑為40μm～200μm。
16、[6]根據(jù)[1]至[5]中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，基于布厄特(brunauer-emmett-teller，bet)多點(diǎn)法所得的比表面積為1m2/g～200m2/g。
17、[7]根據(jù)[1]、[2]及[4]至[6]中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，對(duì)根據(jù)[1]或[2]所述的多孔質(zhì)粒子進(jìn)行配體修飾。
18、[8]根據(jù)[3]或[7]所述的多孔質(zhì)粒子，其中，所述配體為選自由包含離子交換基的配體、親和配體及包含疏水性基的配體所組成的群組中的一種以上。
19、[9]一種液相色譜載體，包含根據(jù)[1]至[8]中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子。
20、[10]一種液相色譜裝置，包含填充有根據(jù)[9]所述的液相色譜載體的分離管柱。
21、[11]一種分離精制方法，為生物體高分子的分離精制方法，
22、包含使用根據(jù)[10]所述的液相色譜裝置對(duì)生物體高分子進(jìn)行分離精制的工序。
23、[12]根據(jù)[11]所述的分離精制方法，其中，所述生物體高分子的大小為1nm～100nm。
24、[13]根據(jù)[11]或[12]所述的分離精制方法，其中，所述生物體高分子為抗體。
25、發(fā)明的效果
26、根據(jù)本發(fā)明，在生物體高分子等目標(biāo)物質(zhì)的分離、精制時(shí)，即使在高流速條件下也可實(shí)現(xiàn)大的吸附容量。
1.一種多孔質(zhì)粒子，其特征在于，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多孔質(zhì)粒子，其特征在于，細(xì)孔徑為650nm以上。
3.一種多孔質(zhì)粒子，由配體修飾，所述多孔質(zhì)粒子的特征在于，
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，主要成分為乙酸纖維素或纖維素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，中值粒徑為40μm～200μm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子，其中，基于布厄特多點(diǎn)法所得的比表面積為1m2/g～200m2/g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多孔質(zhì)粒子，其中，對(duì)如權(quán)利要求1或2所述的多孔質(zhì)粒子進(jìn)行配體修飾。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多孔質(zhì)粒子，其中，所述配體為選自由包含離子交換基的配體、親和配體及包含疏水性基的配體所組成的群組中的一種以上。
9.一種液相色譜載體，包含如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的多孔質(zhì)粒子。
10.一種液相色譜裝置，包含填充有如權(quán)利要求9所述的液相色譜載體的分離管柱。
11.一種分離精制方法，為生物體高分子的分離精制方法，
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分離精制方法，其中，所述生物體高分子的大小為1nm～100nm。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的分離精制方法，其中，所述生物體高分子為抗體。